Меню
Главная
Случайная статья
Настройки
|
Окрашивание по Романовскому — Гимзе — цитологический метод окрашивания микроорганизмов, клеточных структур и тканей различных видов (в том числе крови) для изучения методом световой микроскопии. Предложена в 1904[1] году Густавом Гимзой. В авторской версии название красителя — «Giemsasche Lsung fr die Romanowsky Frbung» (Раствор Гимзы для окраски по Романовскому)[2]. Окрашивает ацидофильные образования в различные оттенки красного цвета, базофильные — в цвета от пурпурного до синего.
Содержание
Приготовление красителя
Готовый жидкий краситель перед окрашиванием мазков разводят из расчёта 1—2 капли красителя на 1 мл дистиллированной воды. Мазки окрашивают 20—25 минут при 37 °C во влажной камере (закрытая чашка Петри с увлажнённым фильтром на дне). После окрашивания мазки промывают в проточной воде, сушат на воздухе и исследуют при масляной иммерсии.
Красящую смесь Романовского-Гимзы, которая имеет в основе краску Романовского-Райта, в виде порошка (коммерческий краситель) растворяют в смеси равных объёмов метилового спирта и глицерина (800 мг красителя на 100 мл растворителя). Краситель растворяется плохо, поэтому лучше его растереть с растворителем в количестве 300 мг на 100 мл, а затем, помешивая, добавлять краситель до получения нужной концентрации. Приготовление красителя часто занимает несколько дней. Важно в качестве растворителей использовать химически чистый метиловый спирт и глицерин, так как примеси ухудшают свойства красителя. Вместо метилового спирта можно применять 100 % этиловый спирт. Приготовленную красящую смесь хранят в сухом прохладном месте в плотно закрытом сосуде.
Специальный стандартный раствор Гимза- Азур II — 3,772 г
- Эозин — 2,165 г
- Метиленовый синий — 1,563 г
- Метанол (ЧДА) — 750,0 мл
- Глицерин (ЧДА) — 256,0 мл
Методика окраски- Мазки, фиксированные в метиловом спирте, окрашивают раствором (1 мл готовой жидкой краски + 2 мл основного буферного раствора + 47 мл дистиллированной воды) в течение 40—120 мин (продолжительность окрашивания подбирают эмпирически). Пользуются фосфатным буфером, но рН буфера зависит от вида мазка: для мазка костного мозга — 5,8—6,0, для мазка крови — 6,4—6,5, для выявления простейших — 6,8, малярийного плазмодия — 7,0—7,2.
- Ополаскивают в дистиллированной воде, высушивают и исследуют при иммерсии[уточнить].
Результат окраски
|
|