Шоссе начинается северо-западу от Нахаль Оз на границе с сектором Газа, и проходит через города Нетивот, Беэр-Шева и Димона. Далее шоссе 25 продолжается на юго-восток в сторону пустыни Арава, где недалеко от Мёртвого моря заканчивается на пересечении с шоссе 90. Длина шоссе составляет по оценкам израильского министерства транспорта 172 км и 780 метров.
